Analiza kompleksów białko-białko oraz białko-kwasy nukleinowe

Oddziaływania białko-białko wpływają bezpośrednio na procesy biologiczne wszystkich żywych organizmów na wielu poziomach ich funkcjonowania.  Z ok. 30 tysięcy ludzkich genów kodujących białka w ok. 80% ich aktywność biologiczna wymaga tworzenia kompleksów z innymi białkami.  Analizy kompleksów białko-białko oraz białko-kwasy nukleinowe są wykonywane na poziomie in silico (Rys.1) , in vivo oraz in vitro.  Wybór metody analizy kompleksów determinuje etap prac (odkrycie/walidacja/detekcja) oraz rodzaj i dostępności materiału biologicznego. Ważnym elementem determinującym wybór metody in vitro jest ich zdolność do dostosowania warunków analizy do specyficznych własności fizyko-chemiczne badanego białka i jego kompleksów.  Do jednych z częściej stosowanych metod analizy kompleksów in vitro należą metody oparte o elektroforezę natywną, które łączą w sobie funkcje analityczne i preparatywne i pozwalają dzięki temu na dalszą charakterystykę składników kompleksów metodami spektrometrii masowej, NMR, lub oznaczanie ich aktywności enzymatycznej/biologicznej.  Do analizy kompleksów białko-białko najczęściej stosuje się m. BlueNative a kompleksów białko-kwasy nukleinowe metodę EMSA. W celu zwiększenia rozdzielczości tych metod opracowano ich wersje 2D które pozwalają na identyfikacje pojedynczych składniki kompleksów.

Zapewnieni powtarzalności tych analiz wymaga standaryzacji sposobu przygotowania żeli polikarylamidowych (polecamy nasz Poradnik pt "Jak powtarzalnie spolimeryzować żel poliakrylamidowy") oraz odpowiedniej jakości odczynników chemicznych. Polecamy szeroką game dedykowanych odczynników do przygotowania, przeprowadzenia oraz wizualizacji białek w żelach poliakrylamidowych w pełni kompatybilnych z dalszą ich analizą np metodami spektrometrii masowej.

Nie bez znaczenie jest też zapewnienie powtarzalnych warunków elektroforezy natywnej. Oferujemy unikalny w skali świata, sprzet DNA

Pointer(R) System (Rys . 2)



Rysunek 1   Mapa 3263 oddziaływań białka PT53 z innymi białkami 

                      człowieka ( wg BioGIRD 3.5)

DNAPointer® System v 6.0

Parametry użytkowe DNAPointer System v 6.0

Zakres temperatur żelu         2 - 65°C

Nastawa temperatury co         0,1°C


Dokładność stabilizacji temperatury żelu     0,2°C

Maksymalna liczba prób          44

Parametry techniczne:

 

Napięcie (max.)            3000 V

Natężenie prądu (max.)          300 mA

Moc                  600 W

Wymiary (sz x gł x wys)             350 x 420 x 380 mm

Waga                  22 kg

Zasilanie               230 V/50 Hz

DNAPointer ® System v 6.0 

stabilizuje temperature żelu/prób w czasie elektroforezy na poziomie 0,2°C co w czsie antywnych rozdziałów  np typu BlueNative lub EMSA zapewnia: 
  • 98% powtarzalność rozdiałów (EMSA, BlueNative, etc)
  • skrócony do 20% czas analizy w stosunku do klasycznych apratów do elektroforezy płytowej pozwla miedzy innymi na analizę stechiometrii i kinetyki powstawania kompleksów
  • optymalizacje temperatury analizy w zakresie od 4C do 65C
Metoda ta dzięki połączeniu analitycznej i preparatywnej funkcji w czasie jednego rozdziału kompleksów białkowych/ kw.nukleinowych umożliwia dalszą ich charakterytykę metodami takimi jak:

  • zymogramy - aktywność enzymatyczna 
  • immunodetekcję białek np. metodą np Western blotting
  • spektrometria masowa,  spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR)
  • mrożonej mikroskopii elektronowej (Cryo-EM)


Zamawianie

Nr Kat

Produkt

Wyposażenie

 

105-100

 

DNA Pointer® System v 6.0

 

 

 


Parametry użytowe:

- cyfrowy zasilacz wysokonapięciowy do 3000V;  - termodynamiczny układ chłodzący na ogniwach Peltiera, stabilizujący temperaturę żelu w zakresie 4 - 65 st. C z dokładnością 0,1 st.C oraz komorą elektroforetyczną na szyby o wymiarach 210 x 170 mm.

 - jednostka sterująca z ekranem dotykowym umożliwiaja programowanie oraz odczyt warunków elektroforezy w czasie rzeczywistym. Oprogramowanie pozwala użytkownikowi: zapisywać profile elektroforez za pomocą gotowych szablonów dla każdego rodzaju elektroforezy (MSSCP, EMSA, BlueNative ), Dowolnie programować parametry elektroforezy (temperaturę, napięcie, moc, czas). Program posiada funkcję Gel Saver, pozwalającą na zachowanie wysokiej jakości rozdziału po zakończeniu elektroforezy.


Wyposażenie i akcesoria

Nr kat

Opis

DNAPointer System nr kat.   105-100

105-100 DNA Pointer System v 6.0 
105-111 Przekładki DNA Pointer   0,5 mm (2 szt)
105-112 Przekładki DNAPointer   1,0 mm (2 szt)
105-113 Przekładki DNAPointer   1,5 mm (2 szt)
105-114 Przekładki DNAPointer   2,0 mm (2 szt)
105-120 Grzebień DNAPointer 0,25mm/20 studzienek
105-121 Grzebień DNAPointer 0,5 mm/20 studzienek
105-122 Grzebień DNAPointer 0,5 mm/24   studzienek
105-123 Grzebień DNAPointer 0,5 mm/33   studzienek
105-124 Grzebień DNAPointer 0,5 mm/44   studzienek
105-125 Grzebień DNAPointer 1,0 mm/20   studzienek
105-126 Grzebień DNAPointer 1,0 mm/24   studzienki
105-127 Grzebień DNAPointer 1,0 mm/33   studzienki
105-128 Grzebień DNAPointer 1,0 mm/44   studzienki
105-129 Grzebień DNAPointer 1,0 mm/17 studzienki
105-130 Uszczelka U-kształtna DNAPointer 0,5 mm
105-131 Uszczelka U-kształtna   DNAPointer 1,0 mm
105-132 Uszczelka U-kształtna   DNAPointer 1,5 mm
105-133 Uszczelka U-kształtna   DNAPointer 2,0 mm
105-134 Uszczelka U-kształtna   DNAPointer 0,5 (26*16) mm
105-150 Szyby do zastawu DNAPointer v.4  (1 kpl = 2 szt)   24x19
105-151 Szyby do zastawu DNAPointer v.6  (1 kpl = 2 szt)   21x17
105-161 Multipol Zestaw DNAPointer v.4
105-162 Folia przekładkowa do Zest. Multipol (10 szt)
105-163 Wypełnienie   MULTIPOL DNA 10 mm 19x19
105-171 Statyw do suszenia szyb DNAPointer
105-191 Zestaw Dryout do suszenia żeli PA DNAPointer v. 5.0
105-192 Folia do zest. DRYOUT DNAPointer (35 żeli)
105-193 Folia do zest. DRYOUT DNAPointer (100 żeli)
105-200 Oprogramowanie DNA Pointer System